Цель исследования – диагностика потенциально чрезвычайно опасных, угрожающих жизни опухолей уринарного тракта высокой степени злокачественности (HGUC). Цитологическое исследование введено в мировую медицинскую практику в 1945 году Дж. Папаниколау.

Уринарный тракт – это анатомические структуры, выполняющие функцию мочевыделения. Он состоит из почечных лоханок, мочеточников, мочевого пузыря и уретры. Переходный эпителий или уротелий, покрывающий уринарный тракт при определённых обстоятельствах становится источником новообразований, которые весьма разнообразны, как по морфологическому строению, так и по степени злокачественности. Первичные злокачественные опухоли почечной лоханки и мочеточника составляют всего 5-6% от всех опухолей уротелия, так что, основная доля угрожающей жизни патологии приходится на опухоли мочевого пузыря (МЗ РБ ГУ РНПЦ ОМР им. Н.Н. Александрова. «Алгоритмы диагностики и лечения злокачественных новообразований», 2012).

Ежегодно в РБ выявляют 1000-1200 новых случаев рака мочевого пузыря на различных стадиях развития. Страдает преимущественно мужское население. В Европейских странах, в структуре общей онкологической заболеваемости, рак мочевого пузыря занимает 4-е место у мужчин и 14-е – у женщин. В подавляющем числе случаев – это уротелиальная карцинома высокой степени злокачественности (HGUC), которая проявляет себя клинически гематурией, т.е. появлением крови в моче. За последние 20 лет в нашей стране заболеваемость выросла почти в 2 раза. Относительно высокий показатель отношения смертности к заболеваемости, который составляет 0.33, означает, что каждый третий пациент погибает, а это, без сомнений, свидетельствует об отсутствии эффективных неинвазивных методов ранней диагностики.

В последние годы учёные рассматривают возможность вирусной природы рака мочевого пузыря. Полиомавирус человека 1 , более известный, как полиома- BK-вирус , уже многие годы притягивает к себе внимание исследователей в данной области, как потенциально опасный фактор развития неопластических процессов мочевыводящей системы. Этот вирус широко распространён среди всей популяции человека. Можно сказать, что им инфицировано до 90% взрослого населения нашей планеты. Впервые, штамм человеческого полиомавируса был выделен из мочи ещё в 1971 году. В названии этого штамма заглавные латинские буквы BK соответствуют инициалам того пациента, у которого его обнаружили. И за последние два десятилетия, наши представления о роли этого вируса серьёзно эволюционировали. Неоспоримым является тот факт, что при снижении иммунологической защиты, а именно при проведении цитостатической терапии у пациентов с аллографт трансплантацией почек, полиома-BK-вирус является основной причиной BKV аллографт нефропатии, уретрального стеноза и геморрагического цистита (Drachenberg CB, Hirsch HH, Ramos E, Papadimitriou JC (2005). Hum. Pathol. 36: 1245-1255).

Вирус проникает в организм человека через верхние дыхательные пути и долгое время бессимптомно персистирует преимущественно в уротелии, а также в костном мозге, вызывая латентное инфицирование. Здоровая иммунная система контролирует бессимптомное пребывание вируса в организме человека. Однако, при нарушеннии иммунного надзора, возникающего по тем или иным причинам, вследствие угнетения функции иммунитета, происходит активация BKV-вируса. А морфологическим отражением перехода из латентного состояния в активное, является появление специфических клеток. В уротелиальном эпителии вирусные частицы образуют внутриядерные включения, в результате чего, клетка приобретает очень характерные морфологические черты. Первое описание таких клеток с включениями вирусных частиц дал доктор Koss LG 40 лет назад, обнаружив их в моче пациента после проведенной трансплантации почки. Он назвал их Decoy-клетки. Они могут быть 4-х типов и до последнего времени, среди цитопатологов доминируют представления, что эти инфицированные клетки нельзя относить к злокачественным. Но их появление в моче пациента с аллографт трансплантацией, является самым ранним признаком угрозы BKV аллографт нефропатии. На данных рисунках представлены 4 морфологических типа Decoy-клеток.

Иными словами, Decoy- клетки – самые ранние предвестники отторжения трансплантата. Но только с внедрением в практику жидкостных технологий приготовления препарата из свежевыпущенной мочи или из смыва мочевого пузыря, с окраской по Папаниколау, стало возможным обнаруживать эти клетки, и с высокой чувствительностью и специфичностью отличать их от злокачественных. В настоящее время обнаружение Decoy-клеток в моче является скрининговым тестом BKV нефропатии. Кроме того, у пациентов, перенесших трансплантацию почки, наряду с Decoy-клетками, часто обнаруживают клетки уротелия, с признаками выраженной клеточной атипии, соответствующими цитоморфологическим характеристикам уротелиальной карциномы высокой степени злокачественности, а также клетки, которые несут в себе одновременно черты, присущие и Decoy-клеткам, и клеткам HGUC. Эти клетки не только имеют смешанные черты Decoy-клеток и злокачественных, но и несут в себе протеины (SV-40 T) полиома-BK-вируса (Galed-Placed I, Valbuena-Ruvira L. Diagn Cytopathol.2011 Dec;39(12):933-7). Многие из клинических случаев, описанных в литературе, свидетельствуют о возможной онкогенной роли полиома-BK-вируса в возникновении уротелиальной карциномы (Hassan S, Alirhayim Z, Ahmed S, Amer S. Case Rep Nephrol.2013; 2013:858139). Протеины BKV оказывают повреждающее действие на синтез белков-супрессоров опухолевого роста (р53), что приводит к нарушению процесcов восстановления ДНК. Этот патогенетический механизм лежит в основе возникновения генетически нестабильных изменений, приводящих к трансформации нормального уротелия сначала в диспластичный, а затем в уротелиальную карциному высокой степени злокачественности (HGUC). HGUC характеризуется высокой частотой рецидивов и прогрессии до мышечно-инвазивных стадий Т2,Т3,Т4 с метастазами в лимфатические узлы. в 95% случаев всех смертельных исходов от рака мочевого пузыря устанавливают диагноз HGUC. Итак, достоинства цитологического исследования уротелиального тракта:

  • Неинвазивность процедуры (анализ из «баночки»);
  • Высокая специфичность диагностики HGUC, приближающаяся к 100%;
  • Высокая чувствительность диагностики HGUC ~ 80%;
  • ~30-70% пациентов с HGUC выживают;
  • ~5-15% случаев HGUС прогрессируют; статистика США.
  • 535 000 пациентов с раком мочевого пузыря выжили.

Предпочтительной технологией приготовления цитологического препарата мочи является жидкостная осаждением (BD SurePath), которую мы используем в нашей лаборатории. Тонкослойные мазки позволяют проводить дальнейшую диагностику с использованием всего арсенала молекулярно-генетических методов (иммуноцитохимия, FISH, и т.д.).

Цитологический диагноз HGUC объединяет в себе все генетически нестабильные злокачественные опухоли уротелия, гистологически весьма разнообразные. С целью оптимизации подходов к интерпретации уринарной цитопатологии и стандартизации критериев диагностики, на международном конгрессе в Париже, в 2013 году была принята новая цитологическая система классификации. Она во многом напоминает систему Bethesda для цитологического анализа патологии щитовидной железы и цервикального канала.

Категории Парижская система оценки цитологии уринарного тракта Вероятность злокачественной опухоли
I Неудовлетворительный/недиагностический материал 0-10%
II Негативная по уротелиальной карциноме высокой степени злокачественности
(NHGUC) 		0-10%
III Атипическая уротелиальная клетка
(AUC) 		8-35%
IV Подозрение на уротелиальный рак высокой степени злокачественности
(SHGUC) 		50-90%
V Уротелиальная карцинома низкой степени злокачественности
(LGUC) 		~10%
VI Уротелиальная карцинома высокой степени злокачественности
(HGUC) 		>90%
VII Другие опухоли, первичные и вторичные >90%

Итак, цитологическое исследование мочи с применением жидкостных технологий приготовления мазка и использованием диагностических критериев Парижской классификации 2014 года, является основным неинвазивным методом диагностики и мониторирования уротелиальной карциномы высокой степени злокачественности.

Женщины часто подвергаются заболеваниям мочевой системы, которые носят инфекционный или воспалительный характер. Это объясняется анатомическими особенностями строения женского таза. Не всегда визуального осмотра с использованием цистоскопа достаточно для постановки точного диагноза, поэтому целесообразно провести цитологические исследования.

Цитология мочевого пузыря представляет собой диагностическое мероприятие, которое позволяет проверить мочевой пузырь у женщин на онкологическое заболевание.

Данное исследование назначается в ситуации, когда возникает подозрение на наличие злокачественного образования в органах мочевой системы. Зачастую к подобному методу прибегают пациенты, у которых велика вероятность обнаружения раковых клеток.

Показания к проведению цитологического исследования

Проведение цитологии мочевого пузыря назначается тем пациентам, у которых:

  • уже была выявлена злокачественная опухоль органов мочевой системы, цитологические исследования в этом случае позволяют отслеживать, как протекает заболевание;
  • есть подозрение на наличие злокачественной опухоли, диагностика позволяет выявить раковое образование;
  • присутствует кровь в моче, это служит сигналом о наличии патологии, поэтому врач в обязательном порядке назначает проведение цитологической диагностики;
  • завершается лечение заболевания, своевременная диагностика позволяет оценить ход лечения и избежать рецидива болезни.

Что изучают посредством цитологии

Цитологическое исследование мочевого пузыря - это изучение с использованием микроскопа осадка образца мочи, полученного после центрифугирования биоматериала. Такое исследование проводит специалист-гистолог в лабораторных условиях.

Цель цитологии – обнаружить измененные клетки, которые могут выделяться с мочой. Диагностика позволяет с высокой точностью выявить наличие злокачественного процесса в органах мочевой системы.

Однако при получении неудовлетворительного, атипичного или подозрительного результата следует прибегнуть к сдаче повторных и дополнительных анализов.

Подготовка к процедуре

Для сдачи образца мочи на анализ следует придерживаться таких общих правил, как соблюдение норм личной гигиены и использование стерильной емкости, предназначенной для сбора биоматериала.

Существенное отличие подготовки к цитологии заключается во времени сбора и количестве собираемого материала.

Сбор мочи осуществляется в утренние часы, однако не сразу после пробуждения. Биоматериал для анализа собирается примерно через 2 часа после того, как мочевой пузырь был опорожнен жидкостью, накопленной за ночное время. Если утренний подъем осуществлен в 7 часов, то лучше сразу посетить туалет и опорожниться.

Не следует употреблять много жидкости, поскольку она может разбавить мочу. Рекомендуется сразу сдать образец в лабораторию, чтобы получить более точный результат исследования.

Если биоматериал нужно взять у людей, которые ведут лежачий образ жизни или тяжело болеют, то для таких ситуаций предусмотрен катетер. Следует провести ряд гигиенических процедур: помыть промежности, протереть полотенцем, установить катетер и осуществить сбор образца мочи.

Расшифровка результатов цитологического исследования

В каждой лаборатории результат проведенного исследования выражается в терминах и единицах измерениях, отличных от полученных в других лабораториях. Это зависит от оборудования, которое используется для проведения исследования.

Результаты диагностики предоставляются лечащему врачу, который изучает их и ставит диагноз. Однако существуют общепринятые медицинские термины, которые употребляются во всех клиниках и лабораториях, и имеют однозначную трактовку, доступную даже для самостоятельного понимания.

Неудовлетворительный результат говорит о том, что в процессе исследования не было выявлено то количество неправильных клеток, которое позволило бы сделать точный вывод, поэтому следует повторно сдать анализы.

Атипичный результат свидетельствует о том, что в представленных образцах были выявлены клетки нетипичной формы, однако такие данные не несут в себе точной информации о том, есть ли раковые образования в органах мочевой системы. Требуется сдать дополнительные анализы.

Подозрительный результат служит первым тревожным сигналом. Это говорит о том, что были обнаружены подозрительные клетки, однако такие новообразования могут быть и доброкачественными.

Положительный результат свидетельствует о том, что были обнаружены раковые клетки. Какой именно орган мочевой системы подвергся раковому заболеванию, возможно выявить с помощью диагностики узкой специальности. В дальнейшем назначается специальное лечение.

Отрицательный результат говорит о том, что присутствия раковых клеток в организме пациента выявлено не было.

Для диагностики рака мочевого пузыря необходимо провести не только анализ мочи, но и исследование всего организма в целом. Затем, имея на руках все собранные анализы, лечащий врач ставит диагноз пациенту и подбирает соответствующее лечение.

Положительный момент цитологической диагностики заключается в том, что оно, в отличие от других исследований, проводится быстро (3-5 дней), а полученные результаты дают возможность начать своевременное лечение. Зачастую врач может назначить проведение нескольких таких исследований, чтобы поставить точный диагноз и установить факт онкологии.

1423 0

Говоря о методах лабораторной диагностики ранней онкологической патологии в мочевом пузыре, их сразу следует разделить на рутинные методы, каковыми являются микроскопическое и цитологическое исследование осадка мочи, и довольно сложные биохимические, позволяющие выявить определенные состояния гомеостаза, не только характерные для конкретной формы злокачественной опухоли, но и предшествующие ее возникновению.

Мы имеем в виду биохимическое исследование мочи, которое выявляет нарушенный обмен триптофана, проявляющийся появлением в моче его канцерогенных метаболитов.

Это может быть и у больных раком мочевого пузыря, и у практически здоровых людей, что свидетельствует об определенной предрасположенности к возникновению заболевания и считается одним из эндогенных факторов риска.

То же самое можно сказать и о значении повышенной активности в-гиалуронидазы - фермента мочи, под воздействием которого в мочевом пузыpe происходит распад неканцерогенных комплексов с высвобождением активного начала. Так, комплекс, состоящий из 2-амино-1-нафтола, соединенного с глюкуроновой или серной кислотой в печени и поэтому потерявшего свои канцерогенные свойства, под действием в-гиалуронидазы или сульфатазы мочи распадается в мочевом пузыре с образованием активного 2-амино-1-нафтола, оказывающего канцерогенное воздействие на уроэпителий.

Своевременное выявление ранней онкологической патологии

Говоря о своевременном выявлении ранней онкологической патологии (РОП) в мочевом пузыре, следует согласиться с мнением М. Mebel et al. о том, что, несмотря на значительный прогресс в области диагностики, рутинные методы - исследование эритроцитурии, осмотр доступных отделов мочевого тракта, ректальная пальпация - остаются основой для раннего диагноза, но явно недостаточно используются. Достаточно указать на то, что у многих больных, обратившихся в поликлинику с неурологическими жалобами, наличие в общем анализе мочи эритроцитов не служило поводом для направления к урологу ни для врачей широкого профиля, ни для узких специалистов.

А между тем, проводя проспективное эпидемиологическое исследование контингента из 3400 практически здоровых людей с целью выявления у них РОП мочевого пузыря, мы выполнили 2143 лицам (63,0%) микроскопическое исследование осадка мочи, а 696 (20,5%) - цитологическое и выявили значительный процент патологии у лиц, не собиравшихся обращаться за медицинской помощью, чувствующих себя практически здоровыми.

Гематурия выявлена у 18,1% мужчин в группе риска и 7,9 - контроля, у женщин соответственно, - 23,1 и 10,7%. Естественно, что все эти люди нуждаются в дальнейшем урологическом обследовании, которое позволит установить причину урологической патологии, в том числе и онкологической. Здесь следует подчеркнуть, что лабораторная диагностика ранней онкологической патологии в мочевом пузыре не может быть самостоятельным методом, она, как правило, должна быть дополнена цистоскопическим исследованием с биопсией .

Показаниями для проведения цитологического исследования осадка мочи служат все формы макро- и микрогематурии, неясные дизурии, цисталгии, злоупотребления аналгетиками, профессиональные контакты с ароматическими аминами. Цитологическое исследование незаменимо при опухолях мочевого пузыря интраэпителиального типа - cancer in situ, которые не могут быть выявлены эндоскопически, а также при раке дивертикула мочевого пузыря, стриктурах уретры, малой емкости органа.

Следует еще раз подчеркнуть, что этот теоретически идеальный метод не может быть самостоятельным ни в диагностике рецидивов рака в мочевом пузыре, ни, тем более, при выявлении РОП. По данным многих авторов, это подтверждает довольно высокий процент несовпадений цистоскопической картины с результатами цитологии мочи, только у 70,0% больных уроэпителиальным раком цитологическое исследование выявляет раковые клетки.

J. Tostain et al., анализируя 500 цитологических исследований у 342 больных уроэпителиальными опухолями, показали, что при типичных папилломах мочевого пузыря цитологическое исследование неэффективно, при инфильтративных раках низкой степени злокачественности цитология мочи позволяет поставить диагноз в 66,0% случаев, при высокой - в 80,0%.

Рядом авторов (Mansat A. et al., Droese et al.) установлена четкая корреляция между степенью анаплазии клеток и цитологическим выявлением опухоли. В частности, показано, что при использовании классификации Bergevist I, II, III степени в зависимости от анаплазии клеток, при первой степени опухоль выявлена лишь в 19,0%, второй - 30,0, третьей - 70,0.

До сих пор нет общепринятых цитологических методов исследования опухолей мочевого пузыря. Одни исследователи считают ценным метод эксфолиативной цитологии при исследовании мочевого осадка свежевыпущенной мочи (Енохович В.А., 1966; О.П. Ионова с соавт., 1972), другие предпочитают аспирационную биопсию (Volter D. et al, 1981), третьи указывают, что наилучшие результаты дает метод смыва слизистой оболочки мочевого пузыря (Ломоносов Л.Я., 1978).

Ошибки в цитологической диагностике

Ошибки в цитологической диагностике определяют несколько факторов: плохой материал, который получен при воспалительном процессе или некрозе опухоли, незначительное его количество или слабо выраженная атипия клеток. Поэтому, естественно, ведется поиск наиболее рационального взятия материала для работы. Так N. Holmguist указывает на высокую степень выявляемости рака мочевого пузыря (1,2 на 1000) при цитологическом исследовании влажных препаратов осадка мочи и предлагает использовать эту методику для скрининга.

Л.Я. Ломоносов рекомендует для массовых профилактических осмотров групп повышенного риска способ активного смыва мочевого пузыря в собственной модификации, когда перед проведением смыва тщательно промывается мочевой пузырь фурациллином, после этого вводится 50-100 мл спиртового раствора новокаина из расчета 15 мл 96° спирта на 100 мл 1% раствора новокаина .

Через 5-10 минут раствор собирается в чистую посуду. После макроописания смыва материал центрифугируется при 3000 оборотов в 1 минуту в течение 15 минут, Надосадочная жидкость смывается, а из центрифугата приготовляются мазки.

При этом ряд авторов работали над рациональной техникой приготовления мазков, поскольку задержка внедрения цитологического исследования во многом обусловлена трудностями окраски клеток в моче. Поэтому С. Fiedler et аI. проводят несколько окрасок - метиленовым зеленым, пиронином и хромалауном по модифицированному ими способу.

Ложноположительные результаты чаще всего связаны с неправильной оценкой уротелиальных клеток с диспластическими изменениями при мочекаменной болезни, хроническом воспалительном процессе. Так, из 135 больных с конкрементами верхних мочевых путей у 7,2% установлена цитологическая картина аналогичная высокодифференцированному раку. В моче лиц, длительно страдавших мочекаменной болезнью, С. Dimopoulos et al. наблюдали наличие клеток 3 и 4 степени злокачественности по Паппаниколау и исчезновение их после оперативного удаления камней.

О.П. Ионова с соавт. при воспалительных процессах находили в цитограммах атипичные клетки, мало отличающиеся от опухолевых. Интерпретация цитограмм представляется довольно сложным делом, может быть, поэтому до сих пор нет общепринятых критериев озлокачествления эпителиальных опухолей мочевого пузыря.

Имеющиеся многочисленные данные по этому вопросу касаются, в основном, диагностики рецидивов рака и достаточно редких случаев распознавания "рака в клетке" - cancer In situ. Лишь у отдельных авторов описаны цитограммы при простой и пролиферирующей папилломах мочевого пузыря - Г.А. Арзуманян, В.А. Енохович, О.П. Ионова с соавт., Л.Я. Ломоносов.

Ряд других - М. Beyer-Boon et al. указывают на то, что папилломы вообще не могут быть диагностированы на основании цитограмм, последние при типичных папилломах не отличаются от нормограмм и только обнаружение папиллярных фрагментов опухоли позволяет поставить диагноз.

Дело в том, что цитограммы смывов мочевого пузыря в норме бедны клеточными элементами. Большинство встречающихся клеток - это клетки покровной зоны переходного эпителия. Они крупных размеров, полигональной или вытянутой формы. Ядра мелкие, округлые или овальные, расположены центрально или слегка эксцентрично.

Клетки промежуточной зоны цилиндрической формы, располагаются или в виде папиллярных папоротникообразных структур, или в виде розеток, или в виде виноградоподобных гроздьев. Ядра овальные, хроматин мелкоглыбчатый, равномерно распределяющийся по площади ядра. В отдельных работах обращается внимание на специфические для смывов гигантские многоядерные клетки с частыми фигурами митоза.

Из неэпителиальных элементов обнаруживаются эритроциты, лейкоциты, кристаллы солей. В работе А.В. Журавлева указывается на тс что в смывах в норме не должно быть форменных элементов. При воспалении отмечается увеличение количества клеточных элементов за счет клеток промежуточной и базальной зон, переходного эпителия и клеток воспалительной природы.

В мазках при типичной папилломе обнаруживаются одинаковые по величине клетки цилиндрической, овальной, округлой и веретенообразной формы. Могут встретиться "хвостатые" клетки. Ядра их мономорфные с компактной структурой хроматина, содержат 1-2 ядрышка. Ядерно-цитоплазменное соотношение не нарушено.

По мнению Г.А. Арзуманяна, характерным является отсутствие многоядерных клеток, свойственных верхнему, дифференцированному слою переходного эпителия. М.П. Птохов считает наиболее характерным моментом - наличие вытянутых хвостатых клеток.

Цитологические критерии малигнизации папиллом

Цитограммы пролиферирующих папиллом отличаются более выраженным полиморфизмом и полихромазией клеток. Ядра увеличены в размерах, в них увеличивается количество ядрышек. В.А. Енохович находит характерным для данной группы папиллом наличие овальных и округлых клеток опухоли. Н. Hanschke отмечает большое количество двуядерных клеток.

Л.Я. Ломоносов выделяет следующие цитологические критерии малигнизации папиллом:

Повышенную митотическую активность клеток;
полиморфизм ядер с огрублением структуры;
уменьшение содержания гликогена в цитоплазме;
увеличение клеточных слоев более пяти.

Он указывает, что иногда начинающуюся малигнизацию легче обнаружить в цитограммах, нежели гистологических препаратах.

При переходноклеточной карциноме мочевого пузыря все авторы отмечают полиморфизм, полихромазию клеток цитограммы, нарушение ядерноцитоплазменного соотношения в пользу ядра, изменение структуры хроматина. гипертрофию и гиперплазию ядрышек и дистрофические изменения цитоплазмы. Б.Л. Полонский и Г.А. Арзуманян характерным для рака считают многоядерность клеток.

Естественно, что такое исследование должно производиться опытным специалистом и требует относительно много времени. Поэтому в целях превращения в автоматический скрининг-метод начали использовать импульсную цитофотометрию, которая позволяет подсчитать за одну секунду 1000 клеток, окрашенных флуоресцирующей краской.

В ряде работ (Klein F. et al., 1982; Frankfurt O. et al., 1984; Dean P. et al., 1986) указывается на перспективную роль в диагностическом отношении coстояния цитологического исследования мочи и метода проточной цитометрии при котором производится измерение содержания ДНК, РНК и размеров ядер.

С помощью импульсной цитофотометрии изучали количественно ДНК и белки в эпителиальных клетках свободно вытекающей мочи, промывных видах мочевого пузыря и суспензии из ткани опухоли. Таким образом была выявлена связь между наличием анэуплоидных клеток в смывах мочевого пузыря и развитием инвазий у больных.

Установлено, что большинство поверхностных опухолей мочевого пузыря диплоидно, а инвазию сопровождает анэуплоидность. Поэтому проточно-цитометрический анализ содержания ДНК является количественной мерой для предсказания степени злокачественности опухоли, а также для диагностики cancer in situ.

В работе К. Nielsen дана стереологическая оценка объема ядер илиэистой оболочки мочевого пузыря в норме и злокачественном процессе. Автор исследовал 27 биоптатов из мочевого пузыря: 10 - в норме, 5 - при инфекции, 12 - при опухолях. Морфометрическое исследование установило средний объем ядра в норме и при инфекции, равным 133 и 182 мкм3, при cancer in situ - 536 мкм3.

Помочь выявлению клеток с повышенным содержанием ДНК может предлагаемый фирмой "ЦИТОДИАГНОСТИКА" тест, основанный на количественном определении флуоресценции. Применяемую краску связывают клетки с повышенным содержанием ДНК и это обстоятельство позволяет выявить одну раковую клетку среди тысячи нормальных. Фирма предлагает применять этот тест для скрининга контингентов с повышенным риском заболевания раком мочевого пузыря.

Но следует отметить, что использование предлагаемых методик с целью профилактики опухолей мочевого пузыря встречает большие затруднения, которые начинаются сразу же, уже при заборе мочи - в несвежей моче клетки значительно изменяются. Понятно, что для профилактических осмотров наиболее приемлемым цитологическим исследованием может стать исследование осадка свежевыпущенной мочи, ни метод аспирационной биопсии, ни метод смыва со слизистой оболочки мочевого пузыря не могут стать массовыми.

Цитологическое исследование осадка мочи, примененное нами с целью выявления ранней онкологической патологии мочевого пузыря в профилактически обследуемых контингентах не оправдало наших надежд - ни разу при выполнении обследования 696 практически здоровым лицам, из которых 185 (38,6%) относились к группе риска, а 511 (17,4%) - к контрольной, признаков атипии клеток не было установлено, хотя исследование проводилось опытными цитологами в центральной цитологической лаборатории города

Отдельные методы лабораторного исследования

Отдельные методы лабораторного исследования позволяют выявить известную предрасположенность к возникновению этой формы рака. Мы имеем в виду эндогенные факторы риска - нарушенный обмен триптофана с появлением в моче его канцерогенных метаболитов - 3-оксиантраниловой кислоты, 3-оксикинуренина, кинуренина и др а также повышение активности в-гиалуронидазы мочи.

Наличие канцерогенных метаболитов триптофана в моче свидетельствует о повышенном риске заболевания, часто определяется у больных раком мочевого пузыря, в том числе и рецидивного, указывает на необходимость проводить коррекцию обмена триптофана, т.е. заниматься биохимической профилактикой опухоли.

При формировании групп риска по эпидемиологическим тестам выявление из них лиц с наличием канцерогенных метаболитов триптофана в моче помогает еще более сузить круг лиц. нуждающихся в пристальном внимании уролога.

Для определения спектра метаболитов триптофана в моче обследуемых можно использовать метод одномерной нисходящей хроматографии на бумаге. Экстракцию метаболитов производят однократно из 100 мл утренней мочи по методу Makino в модификации Wachstein, Lobel.

Для этого мочу насыщают сернистым аммонием для осаждения белков и солей. Затем мочу фильтруют. К полученному фильтрату добавляют 20 мл расплавленного фенола и в течение 20-25 минут встряхивают на универсально-встряхивательном аппарате. Полученную смесь отстаивают в делительной воронке, где быстро разделяются два слоя: верхний - желтый с коричневым оттенком - слой фенола, нижний - бесцветный - слой мочи.

Нижний удаляют, к верхнему добавляют 20 мл серного эфира и энергично встряхивают для улучшения растворения фенола в эфире. Фенол при этом переходит в верхний, более светлый слой, а нерастворимая в эфире водная фракция, содержащая ароматические производные триптофана остается в нижней части делительной воронки в виде темного маслянистого слоя объемом 0,5-0,7 мл.

Этот слой осторожно сливают в выпаривательную чашку и высушивают в вытяжном шкафу. Высушенный экстракт растворяют в 0,2 мл дистиллированной воды и в количестве 0,02 мл наносят на хроматографическую бумагу ("Ленинградская медленная"), предварительно промытую смесью эфира и спирта в соотношении 3:1.

После высушивания бумагу помещают в предварительно насыщенную растворителями камеру. В качестве растворителя используют следующую систему растворителей - Н-бутиловый спирт: ледяная уксусная кислота: вода - 4:1:1. Разгон производят при комнатной температуре в течение 20-24 часов.

После этого хроматограммы высушивают и обрабатывают реактивом Эрлиха 12 г парадиметиламинобензальдегида + 20 мл 6NHCI + 80 мл этилового спирта). Сразу же после этого на хроматограммах появляются пятна желто-оранжевого цвета, которые дают с этим реактивом мочевина и ароматические производные триптофана, и пятна голубовато-сиреневого цвета обусловленные индольными производными последнего.

По характерной окраске с реактивом Эрлиха, величине Rf и сравнению со стандартами описанный метод позволяет идентифицировать следующие метаболиты триптофана - мочевину, триптамин, индикан, триптофан, 3-оксикинуренин, кинуранин, 3-оксиантраниловую кислоту. Последняя является наиболее сильным эндогенным канцерогеном для уроэпителия, дает характерное розовато-оранжевое окрашивание с реактивом Эрлиха и величину Rf, равную 0,75-0,8.

Определение активности |киалуронидазы мочи проводится с той же целью. Но этот метод позволяет дифференцировать папилломы мочевого пузыря от инвазивного рака и большинством авторов расценивается как вспомогательный при диагностике эпителиальных опухолей мочевого пузыря

Активность фермента в моче определяется общепринятым фенолфталеиновым методом. Для этого собирается моча за сутки под тонким слоем толуола, который предохраняет ее от разложения; затем определяется ее общии объем, удельный вес, наличие белка, лейкоцитов, сахара и обязательнo проводится посев на микрофлору.

Последний необходим в связи с тем, что различные микроорганизмы, особенно кишечная палочка, могут быть источником в-гиалуронидазы. В случаях инфицирования мочевого пузыря моча из дальнейшего исследования исключается.

Затем из каждого образца отбирается по 4-5 мл мочи, которую центрифугируют на центрифуге ЦНЛ-2 при 8-9 тысячах оборотов в течение 8-10 минут. В дальнейшем по количеству исследуемых проб в градуированные стеклянные центрифужные пробирки объемом 10 мл наливают 0,5 мл 0,1 М ацитатного буфера, сюда же добавляют 0,5 мл 0,05% раствора субстрата фемолфталеинглюкуронида (фирма Sigma) и лишь в самом конце исследуемой и предварительно отцентрифугированной мочи.

Добавление щелочи делало PH смеси равным 10, 2-10, 4, т е. тот оптимум, при котором происходит и наиболее интенсивное малиново-красное окрашивание отделившегося под влиянием мочевой в-гиалуронидазы фенолфталеина. Дальнейшее определение производится на спектрофотометре СФ-4 при длине волны, равной 540 мм

Окрашенные образцы сравнивают с так называемыми "пустыми" баннами, которые содержали те же самые растворы и в тех же самых концентрациях и количествах, но не подвергались инкубации и готовились непосредственно перед определением фенолфталеина в каждом опытном образце.

Количество выделившегося фенолфталеина определяют по предварительно составленной калибровочной шкале с последующим перерасчетом на 1 мл за 1 час инкубации.

Уровень активности энзима при анализе мочи здоровых лиц колебался от 0,4 до 1,1 и составлял в среднем 1,0 ЕД. Фишмана в 1 мл/час. При папилломах мочевого пузыря отмечается повышение активности фермента в 1,2-1,4 раза. Причем, это повышение является постоянным и не зависит от проводимых лечебных мероприятий. При раке мочевого пузыря активность в-гиалуронидазы в моче повышена не менее, чем в 2-3, а иногда и более раз достигая 5 ЕД Фишмана.

При определении активности этого фермента следует учитывать, во-первых, сопутствующие заболевания у пациентов. Это касается, прежде всего, гепатитов и панкреатитов, которые сами по себе дают резкое увеличение его активности в моче. Во-вторых, следует подчеркнуть, что даже про ведение одной лишь цистоскопии, не говоря о более сложных хирургических вмешательствах, сразу же приводит к повышению уровня активности фермента в моче по сравнению с исходными данными, и только через 8-10 дней активность в-люкуронидазы возвращается к исходным цифрам.

По данным М.Н. Власова с соавт., которые мы здесь приводим не отмечается различий в повышении или уменьшении активности фермента в зависимости от возраста и пола больных, а также химиотерапевтического или лучевого методов лечения.

Этот метод авторы используют как вспомогательный для диагностики опухолей эпителиального типа в мочевом пузыре. Он же может быть рекомендован при проведении мероприятий по биохимической профилактике рака мочевого пузыря, направленной на снижение активности в-люкуронидазы в моче для контроля за этой активностью.

Естественно, что из-за трудоемкости и сложности, метод не может применяться в качестве скринингового, но в группах риска применение его вполне оправдано с целью определения лиц, имеющих важный эндогенный фактор риска и в этой связи нуждающихся в соответствующих профилактических мероприятиях.

Пряничникова М.Б.

Цитологическое исследование мочи, или анализ урины на атипичные клетки, представляет собой изучение структуры элементов этой биологической жидкости под микроскопом. Оценка материала проводится для установления наличия или отсутствия в клетках признаков злокачественного перерождения и других патологических процессов. Метод позволяет вовремя обнаружить или контролировать заболевания органов мочевыделительной системы.

Назначение исследования

Моча на цитологию сдается при таких состояниях:

  • подозрение на новообразование в мочевом пузыре, а также почках, мочеточниках, уретре, предстательной железе (простате). Показанием является гематурия – наличие в урине клеток крови – эритроцитов. В некоторых случаях анализ назначают при нарушении мочеиспускания;
  • контроль возможного рецидива рака мочевыводящих путей;
  • невозможность использовать кольпоскопию и другие методы для изучения состояния половой системы у женщин (у девственниц, во время менструации, при обширных воспалениях). В этом случае исследуются клетки мочи.
Лабораторное цитологическое исследование проводят, чтобы диагностировать онкологические заболевания мочеполовой сферы

Цитология осадка урины не может диагностировать такие доброкачественные опухоли мочевого пузыря, как липому, фиброму, лейомиому, нейрофиброматоз, а также патологическое разрастание тканей – эндометриоз. Однако метод позволяет вовремя выявить папилломы, предупредив их перерождение, а также обнаружить раковые клетки.

Как подготовиться к цитологическому анализу мочи

Исследование не требует специальной подготовки. Перед процедурой желательно провести гигиену половых органов, а затем собрать урину в стерильный контейнер, герметично закрывающийся крышкой.

Доставить образец в лабораторию желательно в течение двух часов.

Время забора жидкости зависит от направления исследования:

  • Для анализа гормональных сдвигов на протяжении менструального цикла женщины требуется первая порция утренней мочи, содержащая больше всего клеточных элементов, хотя иногда используется материал, взятый в другое время суток.
  • Для обнаружения атипичных клеток, наоборот, не рекомендуется изучать утреннюю урину, лучше подождать 3 часа после первого мочеиспускания и помочиться в емкость, собрав всю выделяемую жидкость.
  • Самые точные результаты при опухолях мочевого пузыря получаются при цитологии мочи, выделенной путем аспирации через катетер – когда жидкость отсасывают шприцем из полости органа.

Этот метод проводит оценку микрофлоры человека

О чем расскажет цитологический тест

На атипичные клетки

Диагностика новообразований мочевыводящих путей основана на слущивании клеток этих опухолей и попадании их в урину:

  • При доброкачественном процессе в материале выявляют отдельные клетки или целые пласты переходного эпителия (слоя, выстилающего внутреннюю поверхность мочевого пузыря), строение которого напоминает нормальный эпителий органа. Форма этих элементов часто веретенообразная, вместе с ними в моче фиксируют наличие эритроцитов.
  • При раке мочевого пузыря клетки переходного эпителия имеют выраженные признаки атипии – их строение отличается даже друг от друга. Одновременно в образце присутствуют эритроциты в большом количестве и некротические массы.

В лаборатории из осадка материала готовят нативные (неизмененные) и окрашенные специальными способами мазки. Затем под микроскопом изучают морфологический состав клеток. Кроме наличия доброкачественной или злокачественной опухоли, цитологический анализ помогает обнаружить другие поражения мочевыводящих путей, например, воспалительный процесс.


Кроме этого, цитологию делают тем больным, кто находится на завершающей стадии лечения заболевания

Результаты исследования на атипичные клетки могут быть такими:

  • Неудовлетворительный образец – собранная моча не подходит для исследования (содержит недостаточное число клеток или примеси, которых не должно быть в материале). Нужно повторить диагностику.
  • Анализ отрицательный – раковые клетки в урине отсутствуют.
  • Атипичная цитология мочи – в клетках образца найдены некоторые изменения, но без злокачественных признаков.
  • Подозрительная цитология – клеточный материал не является нормальным, возможен рак.
  • Положительный анализ – в урине присутствуют клетки злокачественной опухоли.

Чувствительность метода составляет около 90%. Однако исследование может иметь погрешности, на это влияют инфекционные поражения мочевыводящих путей, недостаточное количество клеток, камни в мочевом пузыре или почках, внутрипузырные инстилляции (вливание медикаментов). Если анализ окажется положительным, для подтверждения диагноза прибегают к цистоскопии – биопсии (отщипыванию) тканей мочевого пузыря с последующим микроскопическим исследованием.


Преимущество данного анализа в том, что цитологический тест по сравнению с другими исследованиями не требует много времени

На колебания гормонального фона

В этом случае также изучают нативные и окрашенные мазки, а затем подсчитывают количество в них клеток разных типов, среди которых:

  • базальные;
  • промежуточные;
  • базофильные (ороговевающие);
  • ацидофильные (ороговевшие);
  • безъядерные ацидофильные.

Особое внимание уделяют последним – число этих элементов в разные дни цикла составляет 2-20% и указывает на выделение гормонов надпочечников (больше, чем яичников).

Прочие показатели

Микроскопия осадка мочи входит в состав общего анализа урины и может выявить и другие патологии. Например, при уровне лейкоцитов выше нормы говорят о воспалительном процессе, а обнаружение бактерий или грибков свидетельствует об инфекциях мочеполовых путей.

Цитологическое исследование мочи позволяет выявить опухолевые поражения мочевыделительной системы, а также неопухолевые изменения эпителия, является дополнительным методом ранней диагностики уротелиального рака, в том числе высокой степени злокачественности (ВСЗ). Неинвазивность и доступность цитологического метода позволяет проводить мониторинг пациентов с онкологическим анамнезом в целях выявления рецидивов заболевания.

Синонимы английские

Cytological examination.

Метод исследования

Цитологический метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Суточную мочу.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
  • Исключить (по согласованию с врачом) прием мочегонных препаратов в течение 48 часов до сбора мочи.

Общая информация об исследовании

Моча по сути является биологическим продуктом распада и вывода обменных процессов в организме, по ней можно судить как о состоянии организма в целом, так и о наличии тех или иных заболеваний, процессов и патологий.

Есть несколько видов лабораторных исследований мочи. Биохимический, клинический, суточный, анализ мочи по Нечипоренко, проба Зимницкого, Реберга, Сулковича, бактериологический посев - каждый из методов имеет определенные показания и особенности проведения. Условно их можно разделить на специфические и неспецифические. Вышеперечисленные методы относятся к первым, а неспецифические - иммунохроматографический и химико-токсикологический - позволяют определить наличие и процент содержания спиртосодержащих веществ.

Цитологическое исследование мочи, или анализ урины на атипичные клетки, представляет собой изучение структуры элементов мочи под микроскопом. Оценка биоматериала проводится для установления наличия или отсутствия в клетках признаков злокачественного перерождения и других патологических процессов. Анализ позволяет дать оценку характеристикам морфологической структуры отдельных клеток. Благодаря этому врач в последующем может подтвердить или опровергнуть первичный диагноз, а при необходимости назначить дополнительное медицинское обследование. Это один из самых эффективных способов выявления новообразований злокачественного характера, онкологических заболеваний. Также исследование помогает в определении инфекционных и воспалительных процессов.

Цитологическое исследование отличается тем, что проводится на клеточном уровне . Осуществляется исследование морфологии клеток с использованием микроскопа в целях выявления злокачественных опухолевых или онкологических образований. Оценивается состояние микрофлоры человека, указывается наличие или отсутствие патологического инфекционного и иного процессов, могут определяться следующие виды заболеваний: рак предстательной железы, рак мочевого пузыря, рак мочеточников и уретры, рак почки. Метод считается одним из самых эффективных способов обнаружения перерождений ракового характера на начальном этапе.

Для чего используется исследование?

  • Для оценки характеристик морфологической структуры клеточных элементов в моче, для выявления заболеваний мочеполовой системы.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на наличие уротелиального рака;
  • выделение группы пациентов с высоким риском развития рака ВСЗ в целях дальнейшего обследования;
  • обследование пациентов с доброкачественными процессами (уролитиаз, цистит, доброкачественная гипертрофия предстательной железы, заболевания почек, сахарный диабет, инвертированная папиллома, гиперплазия, нефрогенная аденома);
  • уточнение диагноза при имеющейся онкологии мочевыводящих путей (карцинома мочевого пузыря);
  • гематурия;
  • оценка эффективности лечения;
  • контроль результатов операции.

Что означают результаты?

Цитологическое заключение представляет собой описание общей цитологической картины.

Результат необходимо интерпретировать в соответствии с клиническими признаками и данными анамнеза.

У пациентов с уротелиальной карциномой ВСЗ в анамнезе и отсутствием клинических признаков опухоли возможно наличие недиагностированной опухоли в верхних отделах уринарного тракта. Для таких больных обнаружение в цитопрепаратах атипичных уротелиальных клеток (AUC) означает высокую вероятность клинического выявления опухоли высокой степени злокачественности.

При выявлении атипичных клеток и\или при характерных клинических симптомах, указывающих на наличие злокачественного новообразования, рекомендуется проводить дальнейшую целенаправленную лабораторную и инструментальную диагностику (цистоскопию, биопсию).



Общий анализ мочи с микроскопией осадка

Определение риска возникновения и неблагоприятного течения заболевания уротелиального рака мочевого пузыря, определение p16ink4a в осадке мочи

Антиген рака мочевого пузыря (UBC)

Кто назначает исследование?